2013-08-21
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液相色譜儀常見故障分析及解決要點
既使日常精心維護的液相色譜儀，隨著使用時間的增加或使用者經驗不足也會出現一些問題或故障。樣品中溶劑出峰時，使用流動相作樣品的 溶劑;出現進樣閥殘余峰時，使用強溶劑清洗進樣閥，并改進閥和樣品的清洗程序;流動相用水不合格率，應使用HPLC級的水。
既使日常(chang)精心維護的(de)液相(xiang)色譜儀(yi)，隨著使用時間的(de)增加或使用者經驗不足(zu)也會(hui)出現(xian)(xian)一些(xie)問(wen)題(ti)或故障(zhang)。現(xian)(xian)將液相(xiang)色譜儀(yi)容易出現(xian)(xian)的(de)故障(zhang)及(ji)解決辦法介紹如下：
1.保留時間變(bian)化(hua)
保(bao)留(liu)時間的變化有三中情況：波動、縮短、延長。
保(bao)留(liu)時間出(chu)現波動時，應檢查柱(zhu)溫(wen)是否處于恒溫(wen)狀態，如(ru)果設置為室溫(wen)，氣(qi)溫(wen)的變化
會引起保(bao)留時(shi)(shi)間(jian)的波動，應該(gai)設置為恒定溫度;等度和梯(ti)度間(jian)還沒有充(chong)分達(da)到(dao)平衡狀態時(shi)(shi)，應該(gai)用十倍以上(shang)柱體積的流動相去平衡色(se)譜(pu)柱;緩沖(chong)液(ye)濃度太低時(shi)(shi)，應換用>25mmol/L的緩沖(chong)液(ye);色(se)譜(pu)柱被污染或已經接近柱壽命時(shi)(shi)，應更(geng)換保(bao)護柱或換新色(se)譜(pu)柱。
保留時(shi)間縮短時(shi)，流速增加，應(ying)檢(jian)查(cha)流速的(de)設定(ding);柱(zhu)溫高時(shi)，應(ying)檢(jian)查(cha)柱(zhu)的(de)設置;進樣量(liang)太大時(shi)，減(jian)少(shao)樣品(pin)用量(liang)或(huo)降(jiang)低樣品(pin)濃度;流動(dong)相(xiang)(xiang)的(de)組(zu)成發生了改變，比如流動(dong)相(xiang)(xiang)中易(yi)揮發有機相(xiang)(xiang)蒸發，兩相(xiang)(xiang)之間互(hu)溶不好，會(hui)導致流動(dong)相(xiang)(xiang)不均勻或(huo)某一相(xiang)(xiang)出現部(bu)分沉淀;流動(dong)相(xiang)(xiang)的(de)PH值應(ying)保持(chi)3~7.5范圍內(nei)，否則(ze)會(hui)引起柱(zhu)鍵合相(xiang)(xiang)的(de)流失。
保留時(shi)間延長時(shi)，流速(su)減小，應檢(jian)查流速(su)的設定(ding)和管(guan)路是否(fou)有泄露;柱溫低(di)時(shi)，檢(jian)查
柱溫的(de)設置;流動(dong)相(xiang)(xiang)的(de)組成發(fa)生(sheng)了改變(bian)，比如流動(dong)相(xiang)(xiang)中易揮發(fa)有機相(xiang)(xiang)蒸發(fa)，兩相(xiang)(xiang)之間(jian)互溶不(bu)好(hao)，會導致(zhi)流動(dong)相(xiang)(xiang)不(bu)均勻或某一相(xiang)(xiang)出現部分沉(chen)淀;檢查流動(dong)相(xiang)(xiang)的(de)pH值是(shi)否(fou)3~7.5范圍內，否(fou)則會引起柱鍵合相(xiang)(xiang)的(de)流失。
2.峰拖(tuo)尾(wei)
色譜(pu)柱(zhu)(zhu)超(chao)載時(shi)，要減少(shao)進樣(yang)量或(huo)稀釋樣(yang)品(pin)或(huo)使用(yong)(yong)高溶量的(de)色譜(pu)柱(zhu)(zhu);色譜(pu)柱(zhu)(zhu)性能不佳時(shi)，更換(huan)色譜(pu)柱(zhu)(zhu);死體積(ji)或(huo)柱(zhu)(zhu)外體積(ji)過(guo)大時(shi)，將連接降至zui低(di)，并對(dui)所有(you)連接點作(zuo)合理的(de)調整，盡可(ke)能采用(yong)(yong)細內徑的(de)連接;加入硅羥基，其作(zuo)用(yong)(yong)是純化(hua)(hua)色譜(pu)柱(zhu)(zhu)，增加緩沖液的(de)濃(nong)度，降低(di)流(liu)動(dong)相的(de)pH值，純化(hua)(hua)樣(yang)品(pin);出現峰干(gan)擾時(shi)，應清潔樣(yang)品(pin)，調整流(liu)動(dong)相。
3.峰展寬
進(jin)樣體積過大(da)時，用流動相(xiang)配樣;樣品過載(zai)時，進(jin)小(xiao)濃(nong)度、小(xiao)體積樣品;在進(jin)樣閥中
造成峰(feng)擴展時(shi)，進樣前后排出(chu)氣泡，以降低擴散;流(liu)動相粘度過(guo)高(gao)時(shi)，提高(gao)柱溫，并(bing)采用低粘度流(liu)動相;等度洗脫，保留(liu)時(shi)間(jian)過(guo)長時(shi)，要增加流(liu)速或改(gai)用梯度洗脫;柱外體(ti)積過(guo)大時(shi)，[1]將連接(jie)管徑和連結管降至zui小(xiao)。
4.基線噪聲
流(liu)動(dong)相或檢測器中有氣泡時，要對流(liu)動(dong)相進行脫氣處理(li);檢測器燈有連(lian)續噪聲時，更(geng)
換氘燈;出現由污染引起的隨機噪(zao)(zao)聲(sheng)時，應(ying)清洗(xi)色(se)譜(pu)柱、凈化樣品、使用(yong)HIPLC級試劑;偶然(ran)有噪(zao)(zao)聲(sheng)時，可能是來自電源(yuan)的干擾，如(ru)果電壓(ya)(ya)不(bu)穩時，應(ying)采用(yong)穩壓(ya)(ya)電源(yuan)。
5.肩峰或分叉
進樣(yang)(yang)(yang)量太大或(huo)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)濃度過高時，要減少進樣(yang)(yang)(yang)量或(huo)稀釋樣(yang)(yang)(yang)品(pin);樣(yang)(yang)(yang)品(pin)溶劑(ji)太強時，應使(shi)用軟(ruan)弱的(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)溶劑(ji);色(se)譜(pu)柱(zhu)(zhu)性能欠佳時，應更(geng)換色(se)譜(pu)柱(zhu)(zhu)。
6鬼峰
色譜(pu)柱(zhu)未達到平(ping)衡(heng)(heng)時，要繼續平(ping)衡(heng)(heng)色譜(pu)柱(zhu);樣品中溶劑出峰時，使(shi)用流動相作樣品的(de)
溶(rong)劑;出現進(jin)樣閥殘余峰時，使用強(qiang)溶(rong)劑清洗(xi)進(jin)樣閥，并(bing)改進(jin)閥和(he)樣品的清洗(xi)程(cheng)序;流(liu)動相用水(shui)不合格率，應使用HPLC級的水(shui)。
使用注意事(shi)項
在使用混(hun)合(he)溶(rong)劑(ji)作(zuo)流動相(xiang)時(shi)，一定要先混(hun)合(he)，再過0.45um濾膜;等流動相(xiang)恢復至室溫，用超聲波或(huo)He氣(qi)(qi)進(jin)行脫(tuo)氣(qi)(qi)處理后，方可使用。
更(geng)換流動(dong)(dong)相(xiang)時(shi)，必須按一定的(de)(de)程序進行(xing)，否則(ze)會產(chan)生問題。更(geng)換流動(dong)(dong)相(xiang)有三種(zhong)情況(kuang)：互溶性流動(dong)(dong)相(xiang)的(de)(de)更(geng)換、無(wu)互溶性流動(dong)(dong)相(xiang)的(de)(de)更(geng)換和緩沖(chong)溶液的(de)(de)更(geng)換。對于*種(zhong)情況(kuang)，先用(yong)準備(bei)更(geng)換的(de)(de)流動(dong)(dong)相(xiang)把吸濾器*清洗(xi)干(gan)凈，再打開(kai)儀器的(de)(de)排液閥，按清洗(xi)鍵，清洗(xi)泵中的(de)(de)流動(dong)(dong)相(xiang)。
將吸濾器放入新流(liu)動(dong)腥中(zhong)(zhong)，減慢流(liu)速(su)清(qing)洗(xi)(xi)(xi)數分鐘后(hou)關閉排液(ye)閥。接(jie)下來清(qing)洗(xi)(xi)(xi)色譜柱和檢測器檢測池直(zhi)到基線平穩。對于第(di)二種情況(kuang)，先用與新舊流(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)都互(hu)溶的中(zhong)(zhong)間清(qing)洗(xi)(xi)(xi)液(ye)（如：異丙醇）清(qing)洗(xi)(xi)(xi)，再(zai)用新流(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)清(qing)洗(xi)(xi)(xi)，具體過程與*種情況(kuang)相(xiang)(xiang)同。對于第(di)三(san)情況(kuang)，應先用蒸餾(liu)水(shui)作為(wei)中(zhong)(zhong)間清(qing)洗(xi)(xi)(xi)液(ye)進行清(qing)洗(xi)(xi)(xi)，再(zai)用新流(liu)動(dong)相(xiang)(xiang)清(qing)洗(xi)(xi)(xi)即可(ke)。
文章類型：
關鍵字：色譜柱 柱溫 液相色譜儀 互溶性 有機相
