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摘要：呋喃唑酮為殺菌劑, 具有較廣的抗菌譜, zui敏感菌為大腸桿菌，炭疽桿菌，副傷寒桿，痢疾桿菌，肺炎桿菌，傷寒桿菌對之亦敏感。主要用于敏感菌所致的細菌性痢疾，腸炎、霍亂，也可以用于傷寒、副傷寒、賈第鞭毛蟲病、滴蟲病等。與制酸劑等藥物合用可治療幽門螺桿菌所致的胃竇炎。
1.范圍
本標準規定了水產品中呋喃唑酮殘留量的測定方法──液相色譜法。
本標準適用于水產品可食部分中呋喃唑酮殘留量的測定。
2.規范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件，其版本適用于本標準。
GB/T6682-1992分析實驗室用水規格和試驗方法
3.原理
樣品中呋喃唑酮用二氯甲烷提取，蒸發濃縮提取液，無水硫酸鈉去除水分，用正己烷液-液萃取除去脂肪及其它雜質，離心，取下層清液經膜過濾器后用液相色譜儀分離，紫外檢測器檢測，外標法定量。
4.試劑和材料
4.1乙腈：色譜純。
4.2二氯甲烷：色譜純。
4.3正己烷：分析純，用乙腈飽和。
4.485%磷酸：分析純。
4.5乙腈水溶液：乙腈 水（體積分數為80 20）。
4.6無水硫酸鈉：分析純；經640℃灼燒4.0h后，貯于密閉容器中備用。
4.7無水硫酸鈉柱：200mm×24mm（id），內裝50mm~100mm高的無水硫酸鈉。
4.8呋喃唑酮標準品：純度≥99.5%。
4.9呋喃唑酮標準儲備液：稱取10.0mg呋喃唑酮，用乙腈水溶液溶解并稀釋定容至50mL棕色容量瓶中，在冰箱中冷藏保存，保存期一個月。該液1mL相當于200μg呋喃唑酮。
4.10試驗用水：符合GB/T6682一級水標準。
5.儀器和設備
5.1液相色譜儀，配有紫外檢測器。
5.2高速組織搗碎機。
5.3旋轉蒸發儀。
5.3離心機。
5.4振蕩器。
5.5蒸發燒瓶，具塞。
5.6刻度離心管。
5.7膜孔濾器：0.45μm。
6.色譜條件
6.1色譜柱：C18柱,250mm×4.6mm（id），粒度5μm。
6.2流動相：乙腈 水 磷酸（體積分數為40 60 0.1）。
6.3流速：0.8mL/min。
6.4檢測波長：365nm。
6.5柱溫：室溫。
6.6進樣量：20μL。
7.樣品測定
7.1試樣制備
取魚、蝦、蟹、鱉等水產品可食部分，切成不大于5mm×5mm×5mm的小塊后混勻，經高速組織搗碎機搗碎即可，充分混勻。
7.2提取
稱取搗碎樣品約10g（至0.01g），加25mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15min，在振蕩器上振蕩5min，提取液經無水硫酸鈉柱濾入蒸發燒瓶中，殘渣分別用25mL和15mL二氯甲烷按上述方法各重復提取一次，再用15mL二氯甲烷沖洗無水硫酸鈉柱，并采用洗耳球吹出柱中液體，濾液均濾入同一蒸發燒瓶中，濾液于旋轉蒸發儀上在45℃左右水浴下減壓蒸發去除溶劑，蒸發速度控制在每秒一滴。
7.3凈化
用1.0mL流動相和1.0mL正己烷溶解殘渣并充分洗滌蒸發燒瓶，將液體移入離心管中，在4000r/min離心5min，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，再向離心管中加入1.0mL正己烷，混勻2min，離心，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，下層清液經0.45μm膜孔濾器過濾后進HPLC分析。
7.4測定
7.4.1呋喃唑酮標準工作液配制
臨用前，取呋喃唑酮標準儲備液，用流動相稀釋成濃度為0.01μg/mL~1.00μg/mL的標準工作液。
7.4.2液相色譜測定
根據樣品液中呋喃唑酮殘留量情況，選定峰高相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣品液中呋喃唑酮響應值均應在儀器檢測線性范圍內。對標準工作溶液和樣品液等體積參插進樣進行測定。在上述色譜條件下，呋喃唑酮保留時間約為5.8min。
7.5空白試驗
除不加試樣外，按7.2~7.4步驟進行。
8.結果計算與表述
根據標準工作液和樣品液的峰高，按式（1）計算樣品中呋喃唑酮殘留量：（h-h0）×V×1000
C=Cs×···································（1）
hs×m
式中：
C──樣品中呋喃唑酮殘留量，單位為微克每千克（μg/kg）；
h──樣品液中呋喃唑酮的峰高；
hs──標準工作溶液中呋喃唑酮的峰高；
h0──空白試驗的峰高；
Cs──標準工作溶液中呋喃唑酮的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V──樣品液zui終定容體積，單位為毫升（mL）；
m──樣品的稱取量，單位為克（g）。
9.線性范圍、檢測限、回收率
9.1線性范圍
本方法的呋喃唑酮標準工作液線性范圍為0.01μg/mL~1.00μg/mL。
9.2檢測限
本方法的檢測限為1μg/kg。
9.3回收率
本方法回收率為72.8%~96.2%。

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